ЕЛИСА комплет се заснива на чврстој фази антигена или антитела и ензимском обележавању антигена или антитела. Антиген или антитело везано за површину чврстог носача и даље задржава своју имунолошку активност, а ензимски обележени антиген или антитело задржава и своју имунолошку активност и активност ензима. У време одређивања, узорак који се испитује (у коме се мери антитело или антиген) реагује са антигеном или антителом на површини чврстог носача. Комплекс антиген-антитело формиран на чврстом носачу се одваја од других супстанци у течности испирањем.
Додају се ензимски обележени антигени или антитела, која се такође везују за чврсти носач реакцијом. У овом тренутку, количина ензима у чврстој фази је пропорционална количини супстанце у узорку. Након додавања супстрата ензимске реакције, супстрат је катализован ензимом да постане обојени производи. Количина производа је директно повезана са количином испитиване супстанце у узорку, тако да се може извршити квалитативна или квантитативна анализа према дубини боје.
Висока каталитичка ефикасност ензима индиректно појачава резултате имунолошког одговора, чинећи тест високо осетљивим. ЕЛИСА се може користити за одређивање антигена, али се може користити и за одређивање антитела.
Основни принципи ЕЛИСА комплета
Користи специфичну реакцију антигена и антитела да повеже објекат са ензимом, а затим производи реакцију боје између ензима и супстрата за квантитативно одређивање. Предмет мерења може бити антитело или антиген.
За ову методу одређивања потребна су три реагенса:
а Антиген или антитело у чврстој фази (имуни адсорбент)
а¡ Ензим обележен антиген или антитело (маркер)
а¢ супстрат за деловање ензима (средство за развој боје)
Приликом мерења, антиген (антитело) се прво везује за чврсти носач, али и даље задржава своју имунолошку активност, а затим се додаје коњугат (маркер) антитела (антигена) и ензима, који и даље задржава своју првобитну имунолошку активност и ензим. активност. Када коњугат реагује са антигеном (антителом) на чврстом носачу, додаје се одговарајући супстрат ензима. То јест, каталитичка хидролиза или РЕДОКС реакција и боја.
Нијанса боје коју производи је пропорционална количини антигена (антитела) која се мери. Овај обојени производ се може посматрати голим оком, оптичким микроскопом, електронским микроскопом, такође се може мерити спектрофотометром (инструмент за означавање ензима). Метода је једноставна, практична, брза и специфична.